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name: 离子交换层析分离蛋白质
description: 基于蛋白质在特定pH下所带净电荷差异，使用离子交换树脂对蛋白质混合物进行分离。当目标蛋白质的等电点或电荷特性已知，且混合物中各组分在选定pH下净电荷量不同时使用本技能。
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# 离子交换层析分离蛋白质

## 适用场景
- 蛋白质混合物中各组分在特定pH下所带净电荷不同
- 已知目标蛋白质的等电点或电荷特性
- 需要按电荷多少顺序分离蛋白质

## 操作步骤
1. **准备层析柱**：将阴离子交换树脂（带正电荷）或阳离子交换树脂（带负电荷）填充于层析柱中。
2. **平衡柱子**：用适当pH的缓冲液平衡层析柱，确保树脂处于工作状态。
3. **上样**：在使目标蛋白质带净电荷的pH条件下加载样品，带相反电荷的蛋白质会被树脂吸附。
4. **洗脱**：
   - 先用低浓度竞争性离子（如Cl⁻）溶液洗脱结合较弱的蛋白质（电荷较少者）；
   - 逐步提高竞争性离子浓度，依次洗脱结合更强的蛋白质（电荷较多者）。
5. **监测与收集**：通过A₂₈₀（280nm吸光度）实时监测洗脱过程，按洗脱峰分别收集各组分。

## 关键参数
- **pH**：必须控制在使目标蛋白质带净电荷的范围内
- **Cl⁻浓度梯度**：决定洗脱顺序和分辨率
- **A₂₈₀**：用于定量监测蛋白质洗脱

## 注意事项
- 不适用于电荷性质完全相同的蛋白质
- pH选择错误会导致所有蛋白质不带电或带同种电荷，无法分离