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name: 凝胶过滤层析分离蛋白质
description: 利用分子尺寸差异，通过多孔葡聚糖凝胶对蛋白质混合物进行分离。当混合物中各组分分子量存在显著差异时使用本技能，适用于脱盐、分子量估算或初步纯化。
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# 凝胶过滤层析分离蛋白质

## 适用场景
- 蛋白质混合物中各组分分子大小存在显著差异
- 需要按分子尺寸分离生物大分子
- 目标包括脱盐、缓冲液置换或粗分级纯化

## 操作步骤
1. **准备凝胶柱**：选择合适孔径的葡聚糖凝胶（如Sephadex G-50、G-100），装填层析柱并充分平衡。
2. **上样**：将体积适中的蛋白质样品小心加于柱顶，避免扰动凝胶床。
3. **洗脱**：加入缓冲液，让样品自然渗入凝胶并随流动相向下迁移。
4. **分离机制**：
   - **大分子蛋白质**：因体积大于凝胶孔径，无法进入孔内，沿颗粒间隙快速流出（先洗脱）；
   - **小分子蛋白质**：可进入凝胶微孔，在柱中路径更长，滞留时间更久（后洗脱）。
5. **收集**：按洗脱顺序分别收集各组分，大分子先出，小分子后出。

## 关键参数
- **分子大小**：决定是否能进入凝胶孔
- **凝胶孔径**：由凝胶类型决定，需根据目标分子量范围选择
- **样品体积**：不宜过大，通常不超过柱床体积的5%，以免降低分辨率

## 注意事项
- 不适用于分子量相近的蛋白质
- 分离仅依赖分子尺寸，与电荷或亲和力无关